脂肪测定仪--粮油检验 植物油脂中缩水甘油脂肪酸酯的测定3

　3.3 气相色谱-质谱法

　　3.3.1 样品提取

　　称取100-110mg植物油于带有螺旋盖的玻璃管中，加入50μL内标工作液和2mL无水四qing呋喃，涡旋15s使之混匀。加入30μL溴化钠的酸性水溶液，涡旋后在50oC摇床震荡反应15min。加入3mL 0.6%的碳酸氢钠溶液以终止反应。为了将油脂从水相中分离出来，往样品中加入2mL正庚烷，旋涡15s。两相分离后，将上层液相转移至干净的玻璃管中，氮吹至干（35-40oC下，15-20min），并用1mL无水四qing呋喃复溶。

　　然后，加入1.8mL硫酸/甲醇溶液，涡旋10s，然后将其置于40oC摇床震荡反应16h。反应结束后，向样品溶液中加入0.5mL饱和碳酸氢钠溶液，涡旋10s，以终止反应。氮吹至约1mL，以去除有机溶剂，待净化。

　　待净化液中依次加入2mL硫酸钠溶液和2mL正庚烷，涡旋10s充分混合。静置，待两相自然分层后弃去上层液相（含有脂肪酸甲酯的正庚烷），并用正庚烷重复提取1次，残留液待衍生化反应。

　　向残留液中加入250μL饱和苯基硼酸溶液，涡旋10s，室温下超声处理5min。加入1mL正庚烷，涡旋10s，转移上层液相至空瓶；用1mL正庚烷再提取次，混合两次提取液。氮吹至全干。加入1mL正庚烷复溶，涡旋10s至充分溶解，滤膜过滤后转移至进样瓶待测。

　　3.3.2 样品测定

　　气相色谱条件

　　色谱柱：聚二甲基硅氧烷毛细管色谱柱(30m×0.25mm×1.0μm )或相当型号色谱柱。进样量：1.0μL。进样方式：脉冲不分流进样。进样口温度：250oC。载气：高纯氦气（纯度≥99.999%）。流速：0.8mL/min。升温程序：80oC保持1min；以10oC/min 的速率升温至170oC，再以3oC/min 的速率升温至200oC；然后以15oC/min 的速率升温至300oC，保持15min。

　　质谱条件

　　传输线温度：300oC。离子源温度：230oC。四杆温度：150oC。离子源：电子轰击模式（EI）。选择离子监测模式（SIM）参数：（1）3-MBPD的苯基硼酸衍生物（m/z）147（定量离子）；240（定性离子）；（2）3-MBPD-d5的苯基硼酸衍生物（m/z）150（定量离子）；245（定性离子）。溶剂延迟时间：5min。

　　3.3.3 方法学验证

　　3.3.3.1 标准曲线及相关系数

　　配制缩水甘油棕榈酸酯（Gly-P）与内标氘代缩水甘油棕榈酸酯（Gly-P-d5）不同浓度比例的标准溶液（如表4所示），以Gly-P（以Gly计）与内标Gly-P-d5（以Gly-d5计）的质量比为横坐标、以3-MBPD定量离子（m/z 147）与3-MBPD-d5定量离子（m/z 150）的峰面积之比为纵坐标，做标准曲线得到标准曲线方程y=0.7355x+0.0369，计算得相关系数R2=0.9971。

　　表4 Gly-P与内标Gly-P-d5浓度的比例

　　3.3.3.2 方法回收率及精密度实验

　　以不含缩水甘油脂肪酸酯的植物油（特初榨橄榄油）为空白样品基质，分别添加低、中、高3个浓度水平的Gly-P标准品，每个水平重复3次实验，按照前述方法处理和分析样品，计算回收率（如表5所示），平均回收率在83.45%～94.12%，RSD为3.67%~9.04%，回收率和精密度都能满足分析要求。

　　表5 加标回收率和精密度实验结果（n=3）

　　（三）采用标准和*标准的情况，以及与、国外同类标准水平的对比，或者与测试的国外样品、样机的有关数据对比情况

　　本标准等同采用了美国油脂化学家学会（AOCS）的推荐标准Joint AOCS/JOCS Official Method Cd 28-10《Glycidyl fatty acid esters in edible oils》和AOCS Official Method 29a-13《2- and 3-MCPD fatty acid esters and glycidol fatty acid esters in edible oils and fats by acid transesterification》中食用油脂的缩水甘油脂肪酸酯测定方法的内容。本标准发布实施后，将达到*水平。

　　（四）与有关的现行法律、法规和强制性标准、行业标准的关系

　　本标准颁布实施后，填补我国植物油脂中缩水甘油脂肪酸酯测定方法的空白，更有利于行业应用；与现行的法律、法规及其他标准没有矛盾。

　　（五）重大分歧意见的处理经过和依据

　　无。

　　（六）按照标准化法的有关规定，提出强制性标准或推荐性标准的建议

　　建议将本标准作为粮食行业推荐标准使用。

　　（七）废止现行有关标准的建议

　　无。

　　（八）其他应予说明的事项